Reacción en cadena de la polimerasa para la identificación de Salmonella spp. usando el gen invA / Polymerase Chain Reaction (PCR) for identification of Salmonella spp. using the invA gene

Se desarrolló un protocolo de PCR para identificar cepas de Salmonella de diferentes procedencias empleando un set de iniciadores PCR específico a Salmonella, para el reconocimiento de una secuencia de 119 pb del gen invA. Los resultados cumplieron con las máximas de la selectividad: inclusividad, pues todas las 14 cepas de Salmonella ensayadas presentaron señal positiva para el gen, exclusividad ya que ninguna cepa no Salmonella (Shigella, E. coli, E. coli O157:H7) mostró señal positiva, robustez porque en las 14 cepas de Salmonella se obtuvo la señal esperada, en un total de cuatro repeticiones con iguales condiciones de trabajo en cuatro días no consecutivos. Asimismo, fue reproducible, pues los resultados fueron idénticos al modificar las condiciones de reacción. Al comparar la PCR con el cultivo convencional, usando preenriquecimiento no selectivo en agua peptonada y enriquecimiento selectivo en caldo selenito-cistina, se apreció que la PCR fue 100% sensible y especifica, con 100% de inclusividad como de exclusividad.

A PCR protocol was developed to identify strains of Salmonella from different sources using a set of “primers” PCR specific to Salmonella, for the recognition of 119 bp invA gene sequence. The results met the maxims of selectivity: inclusiveness, all strains of Salmonella presented positive signal for the gene, exclusivity since no strain Salmonella (Shigella, E. coli, E. coli O157: H7) showed no signal positive robustness because in the 14 strains of Salmonella expected signal was obtained in a total of four repetitions with equal working conditions in four non-consecutive days. Also it was reproducible, results were identical by modifying the reaction conditions. Comparing PCR with conventional culture, using non-selective pre-enrichment in peptone water and selective enrichment in selenite-cystine broth, it was found that the PCR was 100% sensitive and specific, with 100% of inclusiveness, 100% exclusive and 100% of both positive and negative predictive value.

Agentes etiológicos en infecciones post-quirúrgicas en servicios del hospital "Luis Blanco Gásperi": Carabobo, Venezuela / Etiologic agents in post- surgical infections in hospital services "Luis Blanco Gásperi": Carabobo, Venezuela

Dentro de las infecciones nosocomiales (IN), la infección de sitio quirúrgico (ISQ), es un problema de gran relevancia, sin embargo, el subregistro es muy frecuente. El objetivo de este estudio fue determinar los agentes etiológicos de infecciones postquirúrgicas en el Hospital "Luis Blanco Gásperi", período Junio-Agosto 2012. Se realizó estudio descriptivo, de campo, de corte transversal y no experimental, obteniéndose que de un total de 528 pacientes intervenidos quirúrgicamente, 8,5% (n=45) presentó sospecha clínica de ISQ, resultando con crecimiento microbiano positivo 5,49% (n=29). Los agentes etiológicos aislados predominantemente fueron bacilos gramnegativos (77,27%), con prevalencia de miembros de la familia Enterobacteriaceae, principalmente Escherichia coli (18,18%). Asimismo, se encontró como patrón epidemiológico de los pacientes, un predominio de adultos con una media de 53 años, de sexo femenino y 48,28% provenientes de la misma comunidad (Municipio Valencia, Estado Carabobo). El patrón de susceptibilidad a antibióticos in vitro, reportó un alto índice de sensibilidad a aminoglucósidos y carbapenems, 42,11% de aislados clínicos presentaron algún mecanismo de resistencia a antimicrobianos.

Within nosocomial infections (NI), surgical site infection (SSI) is a problem of great relevance, however, underreporting is common. The aim of this study was to determine the etiological agents of post-surgical infections at the "Luis Blanco Gasperi" Hospital, period June to August 2012. A descriptive field, cross-sectional and non-experimental study was conducted from a totall of 528 patients undergoing surgery, 8.5% (n= 45) had clinical suspicion of SSI resulting positive for microbial growth 5.49% (n= 29). The isolated bacteria were predominantly gram-negative bacilli (77.27%), with prevalence of Enterobacteriaceae family members, particularly Escherichia coli (18.18%). It was also found as epidemiological pattern from patients, a prevalence of adults with an average of 53 years, female and 48.28% from the same community (Valencia municipality, Carabobo state). The pattern of in vitro susceptibility to antibiotics, reported a high rate of sensitivity to aminoglycosides and carbapenems, 42.11% of the clinical isolates showed some mechanism of resistance to antimicrobials.

Efecto de la temperatura de refrigeración y calentamiento de fórmulas lácteas Infantiles en el crecimiento de cronobacter sakazakii / Effect of temperature cooling and heating of powered infant formula on the growth of cronobacter sakazakii

Cronobacter sakazakii (C. sakazakii) es un microorganismo perteneciente a la familia Enterobacteriaceae asociado con patologías como meningitis y septicemia en recién nacidos. Las fórmulas lácteas infantiles (FLI) han sido reconocidas como el vehículo más importante de transmisión de C. sakazakii, por condiciones inadecuadas durante su producción o preparación. El objetivo de la presente investigación fue evaluar el efecto de la temperatura de refrigeración y el calentamiento de las FLI en el crecimiento de C. sakazakii. Las muestras de FLI reconstituidas se contaminaron con 102, 104 y 106 UFC/mL de C. sakazakii y se refrigeraron durante cuatro horas a 4°C, 6°C y 10°C, posterioriormente, se calentaron en baño hidrotérmico hasta 37°C. Las muestras fueron sembradas al tiempo “0” (postrefrigeración) y luego del calentamiento hasta 37°C en placas con agar cromogénico y se incubaron a 35°C por 24h. Para el análisis de los datos se utilizó la prueba de Wilcoxon. Según los datos obtenidos no hubo variación significativa en la población de C. sakazakii en las FLI luego de 4 horas en refrigeración a 4°C, 6°C y 10°C; sin embargo, al calentar las fórmulas hasta 37°C, hubo en todos los casos una reducción de un ciclo logarítmico en la población de C. sakazakii con un valor de p = 0.0056 y Z= 2.752. Se concluye que el calentamiento a 37°C post-refrigeracion de las muestras, disminuye la población de C. sakazakii en FLI (p<0,05)(AU)

Cronobacter sakazakii (C. sakazakii) is a microorganism belonging to the family Enterobacteriaceae associated with diseases such as meningitis and sepsis in newborns. The powdered infant formula (PIF) have been recognized as the most important vehicle of transmission of C. sakazakii, by inadequate conditions during production or during its preparation. The aim of this investigation was to assess the effect of the cooling temperature and the heating of PIF in the growth of C. sakazakii. For this, PIF reconstituted samples were contaminated with 102, 104 and 106 CFU / mL of C. sakazakii and refrigerated for four hours at 4 ° C, 6 ° C or 10 ° C after this hydrothermal bath heated to 37 ° C. Samples were cultured at time “0” (after- cooling) and then heating to 37 ° C in chromogenic agar plates and incubated at 35 ° C for 24h . For data analysis we used the Wilcoxon test. According to the data there was no significant variation in the population of C. sakazakii in PIF after 4 hours in the refrigerator at 4 ° C, 6°C and 10 ° C , however , by heating the formulas to 37 ° C , in all cases there was a reduction of one log cycle in population C. sakazakii with a value of p = 0.0056 and Z = 2.752 . We conclude that heating at 37°C post- cooling of the samples, decreases the population of C. sakazakii in FLI ( p < 0,05 )(AU)

Evaluación de la calidad higiénico-sanitaria de leche cruda y pasteurizada expendida en el estado Carabobo, Venezuela / Leche, bacterias Salmonella spp., calidad microbiológica / Evaluation of the hygienic-sanitary quality of raw and pasteurized milk from Carabobo, Venezuela

En el presente trabajo se evaluó la calidad higiénico-sanitaria de leche cruda y pasteurizada proveniente de diversas zonas del estado Carabobo, Venezuela. Siguiendo la metodología descrita por la APHA y COVENIN, fueron analizadas 100 muestras de leche pasteurizada y 40 de leche cruda. En leche pasteurizada fueron determinados recuentos de: bacterias aerobias mesófilas, coliformes totales, termotolerantes (fecales), mohos y levaduras, en leche cruda sólo se realizaron recuentos de bacterias aerobias mesófilas y la prueba del tiempo de reducción del azul de metileno (TRAM). Se investigó también la presencia de Salmonella spp.Los resultados de la leche pasteurizada, indican que 92% de las muestras cumplieron con los límites para bacterias aerobias mesófilas establecidos en la norma COVENIN. En relación a coliformes totales, 45% de las muestras se encontraron por encima del límite permitido en la Norma y 72% de las mismas excedía el límite de aceptación para coliformes termotolerantes.No se detectó presencia de Salmonella spp. En cuanto a la leche cruda, 72,5% de las muestras presentaron recuentos de bacterias aerobias mesófilas por encima de los límites establecidos, contrario a los resultados del TRAM, según los cuales sólo 30% de las muestras incumplían la norma. Los resultados demostraron que es necesario que las autoridades de salud del país implementen medidas más estrictas en el control sanitario de la leche, desde las fincas de ordeño hasta la industria láctea regional, ya que la elevada microbiota en leche cruda y altos recuentos de coliformes totales y termotolerantes en leche pasteurizada, además de disminuir la vida útil de la leche, podrían representar un riesgo potencial a la salud del consumidor.

In the present study the hygienic-sanitary quality of raw and pasteurized milk from various areas of the State of Carabobo, Venezuela, was assessed. Following the methodology described by the APHA and COVENIN, 100 pasteurized milk samples and 40 raw milk samples were analyzed. Counts of aerobic mesophilic bacteria, total coliforms, thermotolerant (faecal) coliforms, molds and yeasts were determined for pasteurized milk; for raw milk, only counts of mesophilic aerobic bacteria and methylene blue reduction test (MBRT) were carried out. The presence of Salmonella spp. was also investigated. Test results of pasteurized milk indicated that 92% of samples met the limits set for mesophilic aerobic bacteria established by COVENIN; however, 45% of samples were above the limit allowed in the Standard for total coliforms, and 72% of them exceeded the limit of acceptance in terms of thermotolerant coliforms; Salmonella spp. was not observed. With regard to raw milk, 72.5% of the samples had aerobic mesophilic bacteria counts above the limits, contrary to the MBRT results, which claimed that only 30% of samples did not comply with the norm. These findings strongly suggest the need for the country’s health authorities to implement more stringent sanitary control measures on milk from dairy farms and on the regional dairy industry, since the high microbiota found in raw milk and high counts of total coliforms and thermotolerant in pasteurized milk, in addition to diminishing the milk lifetime, could represent a potential risk to the consumer’s health.